Особенности содержания тау –протеина в сыворотке крови больных гепато-церебральной дегенерацией. Волошин – Гапонов И. К - shikardos.ru o_O
Главная
Поиск по ключевым словам:
страница 1
Похожие работы
Особенности содержания тау –протеина в сыворотке крови больных гепато-церебральной - страница №1/1

Особенности содержания тау –протеина в сыворотке крови больных гепато-церебральной дегенерацией.

Волошин – Гапонов И.К.

ГУ «Институт неврологии, психиатрии и наркологии НАМН Украины»



Резюме. Цель исследования – изучение возможности использования тау-протеина как биологического маркера для определения времени и степени аксонального повреждения нервной системы у больных гепато-церебральной дегенерацией (ГЦД). Результаты проведенных исследований показали, что у больных ГЦД в невропатологической стадии болезни имеется достоверное повышение содержания тау-протеина в сыворотке крови. Отмечена зависимость содержания тау-протеина от фазы, длительности и тяжести течения заболевания.

Ключевые слова: гепато-церебральная дегенерация, тау-протеин, биологические маркеры, аксональное повреждение, диагноз.

Введение

Гепато-церебральная дегенерация (ГЦД) (болезнь Вильсона - Коновалова) – тяжелое наследственное прогрессирующее заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, в основе которого лежит нарушение метаболизма меди. ГЦД характеризуется более чем 400 мутациями гена ATP7B,расположенного на длинном плече 13-й хромосомы. Ген ATP7B экспрессируется преимущественно клетками печени. Дефект же кодируемой им АТФ-азы приводит к тому, что свободные ионы меди после “переполнения” буферных систем печени начинают поступать в кровоток и избыточно накапливаются в головном мозге,особенно в его базальных ганглиях.[4,5,6,15]

По мере накопления меди в структурах головного мозга преневрологическая стадия заболевания переходит в невропатологическую с развитием различием неврологических и психопатологических синдромов, а также колец Кайзера – Флейшера.

Согласно данным литературы и нашим данным ГЦД встречается значительно чаще чем диагностируется. Несмотря на длительную историю изучения этого заболевания, диагностика ГЦД запаздывает в среднем на 3-15 лет. Это обьясняется выраженным клиническим полиморфизмом, неспецифичностью основных клинических синдромов, а также тем, что широкий круг врачей, в том числе неврологов и психиатров, имеют недостаточную настороженность в отношении ГЦД. [2,4,7]

Неврологическая стадия заболевания ГЦД приобретает хронический ремиттирующий нейродегенеративный характер в основе чего лежит нарушение метаболизма и изменение конформации клеточных белков с их последующим накоплением и агрегацией в определенных группах нейронов. К таким белкам, изменяющим структуру при нейродегенеративных заболеваниях относится и тау-белок.

В многочисленных экспериментальных работах показано, что физиология и морфология нейрона во многом определяется архитектурой его цитоскелета. Тепловой тау-белок участвует в создании микротрубочек цитоскелета нейрона, регуляции роста аксонов и дендритов, а также принимает участие в проведении потенциала действия. [10,14]

Способность тау-протеина регулировать рост аксонов и дендритов зависит от уровня его фосфорелирования, которое может играть и патологическую роль. В качестве физиологического эффекта нормально фосфорелированного тау-протеина является стимуляция роста нейрона, регуляция аксонального транспорта и управление динамикой сборки и поддержание стабильности микротрубочек. Гиперфосфорелирование этого белка манифестирует агрегацией с образованием токсичных олигомеров, выход его из микротрубочек с дальнейшей дезорганизацией последних, что в результате способствует апоптозу нейрона за счет развития гипоксии и оксидантного стресса. Последнее определяется тем, что в митохондриях, лишенных бесперебойной доставки по микротрубочкам субстратов окисления и кислорода, наступает разобщение дыхательной цепи.

В норме тау-протеины идентифицированы исключительно в нейронах, а в условиях патологии они определяются в нейроглии и других тканях и жидкостях. [8,11,12,13]

Эти данные экспериментов побудили клиницистов исследовать связанный с микротрубочками тау-протеин в цереброспинальном ликворе и плазме крови у больных с демиелинизирующими и дегенеративными заболеваниями. [1,9,16,17]

Однако,мы не нашли в литературе сведений об исследовании тау-протеина у больных ГЦД и применении его как биологического маркера в ранней диагностике этого дегенеративного заболевания.



Обьект и методы обследования

Нами обследовано 32 больных с гепато-церебральной дегенерацией, из них женщин 11 человек и мужчин 21 человек.На период обращения в институт средний возраст больных составил 31,7±8,43 лет. Возрастной диапазон больных был от 20 лет, до 50 лет.

Возраст больных к появлению первых симптомов заболевания составил в среднем 26,0±7,12 лет. С колебаниями от 15 до 49 лет. Время от появления первых симптомов заболевания до постановки окончательного диагноза, а следовательно и начала этиопатогенетической терапии составило в среднем 2,8 года и колебалось от 1 до 7 лет. Длительность заболевания была от 1 года до 15 лет и в среднем составила 9,2±2,3 года.

Диагноз ГЦД ставился или подтверждался в клинике института на основании наличия колец Кайзера – Флейшера, снижения содержания в сыворотке крови церулоплазмина ниже 20 мг/дл и увеличения экскреции меди с мочой более чем 100 мкг/сутки.

Анализ клинической картины у обследованных нами больных выявил полиморфную, разной степени выраженности неврологическую симптоматику с преобладанием поражения подкорковых базальных структур больших полушарий головного мозга. В зависимости от ведущих неврологических симптомов, согласно классификации Коновалова (1960), больные были распределены следующим образом: наибольшее количество больных 14 имело дрожательную форму заболевания. У 9 больных была дрожательно-ригидная форма ГЦД. У 6 больных была экстрапирамидно-корковая форма заболевания. У 2 больных была брюшная форма, а у 1 больного аритмогиперкинетическая (ранняя) форма. У большинства (75%) больных в статусе отмечались кольца Кайзера – Флейшера.

Группа контроля была составлена из 10 пациентов, у которых не было никаких признаков, связанных с повреждением центральной нервной системы. Возраст контрольной группы находился в пределах 26-35 лет и в среднем составил 32,51±3,12 лет.

Для определения содержания теплового белка в сыворотке крови больных и контрольной группы нами был использован иммунофлуоресцентный метод. [18] Этот метод дает возможность выявления субклеточного компонента с помощью специфической иммунологической реакции. Он обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Были использованы стандартные наборы производства фирмы «Sigma» (США).

Данный метод дает возможность как качественного визуального описания особенностей распределения оптической плотности тау-белка у каждого пациента, так и количественного определения уровня тау-белка в сыворотке крови.

Оценка интенсивности флуоресцентного свечения проводилась путем измерения оптической плотности, расчет которой проводился в условных относительных единицах (OD) с применением десятичного логарифма Д= Log 10 Ftau|Fo, т.е. оптическая плотность является отношением плотности фонового свечения (Fo) к плотности свечения конгломерата белка тау (Ftau).

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты проведенных исследований показали, что в сыворотке крови больных ГЦД уровень тау-протеина составил 0,39±0,037 условных единиц оптической плотности (ОД) и был достоверно (р<0,05) выше чем в группе контроля (0,034±0,0032 ОД).

Анализируя зависимость содержания тау-протеина от длительности неврологической фазы заболевания установлено достоверную связь этих показателей. У больных с длительностью неврологической фазы заболевания до 5 лет содержание тау-протеина в плазме крови составило 0,29±0,031 ОД, а у больных, где длительность неврологической фазы заболевания была 5 лет и более, этот показатель был 0,49±0,05 ОД.

Проведенное исследование в динамике у больных, получающих современное патогенетическое лечение, направленное на связывание ионов свободной токсической меди и выведение их из организма с помощью хелатных препаратов (купренила) не показало достоверного снижения содержания тау-протеина в сыворотке крови этих больных.

В связи с этим можно предположить, что стабилизация медьдепонирующего баланса, с нормализацией содержания церулоплазмина в крови, вероятно не может решить всех проблем течения и реабилитации больных ГЦД. Очевидно, в патогенез развития дегенеративного процесса в мозге больных ГЦД кроме токсического влияния свободной нецерулоплазминовой меди, включаются и другие патогенные факторы, в частности и такие как аутоиммунные и гемоциркуляторные.

В своих исследованиях мы не нашли зависимости между формой ГЦД и содержанием тау-протеина в плазме крови больных. Однако отмечается тенденция к повышению (0,43±0,039 ОД) содержания в плазме крови тау-протеина у больных с более тяжелым течением заболевания и особенно у тех больных, у которых МР томографически отмечается мультисистемная атрофия головного мозга.



Также, нами не отмечено достоверных гендерных особенностей содержания тау-протеина в сыворотке крови мужчин и женщин больных ГЦД.

Выводы

  1. Высокий уровень тау-протеина в сыворотке крови больных ГЦД свидетельствует о его гиперагрегации, что обусловлено вторичными нейродегенеративными процессами у этих больных.

  2. Повышенный уровень тау-протеина в плазме крови больных ГЦД может быть ранним биологическим маркером развития неврологической фазы заболевания.

  3. Этот маркер может быть использован для осуществления мониторинга течения нейродегенеративного процесса у этих больных, а следовательно и прогноза течения заболевания.

Литература

  1. Волошина Н. П. Тепловой белок–тау как маркер аксонального повреждения головного мозга / Н. П. Волошина, О. В. Егоркина, Е. А. Лекомцева с соавт. //Український вісник психоневрології. – 2009. – Том 17., вип. 4(61). – С. 3 – 5.

  2. Волошин-Гапонов І.К. Сучасні уявлення про етіологію та патогенез хвороби Вільсона-Коновалова.Український вісник психоневрології, 2012 – Том 20, випуск 3(72), С19-21.

  3. Коновалов Н.В. Гепатоцеребральная дистрофия. М., Медицина,1960, 555 с.

  4. Мартынюк Г.А.,Хорунжевская И.С.Клинико-диагностические особенности семейного случая болезни Вильсона-Коновалова. Хронический гепатит В: практические рекомендации Американской ассоциации по изучению заболеваний печени // РЖГГК.–№1–2008.– С. 4–25.

  5. Морозов С.Г., Усанова М.П., Полещук В.В. и др. Аутоантитела к белкам нервной ткани при гепатолентикулярной дегенерации. Журнал неврологии и психиатрии, 2001,№10, с.37-39.

  6. Никифоров А. С, Коновалов А. Н., Гусев Е. И. Клиническая неврология: Учебник для слушателей последипломного образования: В 3 тт: том 1. 2002.Автор: Никифоров А. С, Коновалов А. Н., Гусев Е. И. Жанр: Руководство. Издательство: Медицина.

  7. Сухарева Г.В. Гепатолентикулярная дегенерация. Кн. Избранные главы клинической гастроэнтерологии., М.2005, с. 199-209.

  8. Avila J. Role of Tau protein in bots Physiological and pathological conditios / J. Avila, J. J. Lucas, Rez Mar, F.  Hernjndes // Physiol. Rev. – 2004. – Vol. 84 – P. 361-384.

  9. Bartosik–Psujek, Contents of tau protein is increased in CSF in patients with MS and correlates with the Ig G intretecal synthesis / Bartosik–Psujek, Halina Archelos // Journal of Neurology. – 2004. – Vol. 251, № 4. – P. 414 – 420.

  10. Brandt R. The tau proteins in neuronal growth and development / R. Brandt // Bioscience, 1996. – P.118 – 130.

  11. Carnerio L. Nod-like protein in inflammation and disease / L. Carnerio, J. Magalhes, I. Tattoli. D. Philpot, et al. // J. Pathol. – 2008. – № 214. – P. 136-148.

  12. Drubin D. Tau protein function in living cells / D. Drubin, M. Kirschner // J.Cell Biol. – 1986. – Vol. 103. – P. 2739-2746.

  13. Goedert M. Molecular characterization of microtubule – associated proteins tau and MAP2 / M. Goedert, R. A. Crowther, C. C. Garner // Trends Neurosci. – 1991. – № 14 (5). – P. 193–199.

  14. Hirano A. Neurons and Astrocytes / A. Hirano // Textbook of Neuropathology Eds. Davis R., Robertson D. – William and Wilkins, 1997. – P. 1-109.

  15. Kusuda Y., Hamaguchi K., Mori T. Et al. Novel mutations of the ATP7B gene in Japanese patients with Wilson disease// J. Hum. Genet. 2000. – 45.

  16. Terzi M.,Birinci A.,Cetinkaya E.,Onar M.K. Cerebrospinal fluid totaltau protein levels in patients with multiple sclerosis // Asta Neurol Scand. – 2007. – V. 15, №5. – P. 325-330.

  17. Zaffaroni M. Biological markets of a MS neurodegenerative phase / M. Zaffaroni // Neurological Sciences. – 2006. – V. 24 (5). – P. 279–282.

  18. Zemian P. F. US Patent and Method of detecting axonally – derived protein tau in patients with traumatic CNS injury / P. F. Zemian // Traumatic CNS injury. – 2003.

Особливості вмісту тау-протеїну у сиворотці крові хворих на гепато-церебральну дегенерацію

Волошин - Гапонов І.К.

ДУ «Інститут неврології, психіатрії та наркології Національної академії медичних наук України», м. Харків



Резюме. Мета дослідження - вивчення можливості використання тау-протеїну як біологічного маркера для визначення часу і ступеню аксонального ушкодження нервової системи у хворих на гепато-церебральну дегенерацію (ГЦД). Результати проведених досліджень показали, що у хворих з ГЦД в невропатологічній стадії хвороби має місце достовірне підвищення вмісту тау-протеїну в сироватці крові. Відмічена залежність вмісту тау-протеїну від фази, тривалості і тяжкості перебігу захворювання.

Ключові слова: гепато-церебральная дегенерація, тау-протеїн, біологічні маркери, аксональне ушкодження, діагноз.
TAU PROTEIN AS THE MARKER OF AXONAL DAMAGE OF CEREBRUM IN PATIENTS WITH HEPATOCEREBRAL DEGENERATION

I.K. Voloshyn - Gaponov

SE "The Institute of neurology, psychiatry and narcology of the NAMS of Ukraine"



Abstract. The aim of the research is to study the possibility of using the tau protein as a biological marker for determination of the time and degree of axonal damage of the nervous system in patients with hepatocerebral degeneration (GCD). The results of undertaken studies had showed that the patients with GCD in neuropathological stage of the disease had a significant increasing of tau protein content in the serum of blood. It was marked the dependence of tau protein content on a phase, duration, severity and course of the disease.

Keywords: hepatocerebral degeneration, tau protein, biological markers, axonal damage, diagnosis.